Uso da microextração por sorbente empacotado (MEPS) para preparo de amostras em análises toxicológicas envolvendo fármacos benzodiazepí­nico / Microextraction by packed sorbent (MEPS) for sample preparation in toxicological analyses involving benzodiazepines

A microextração por sorbente empacotado (MEPS) é uma técnica de preparo de amostras ainda pouco utilizada no âmbito da toxicologia, em que os mesmos princípios da extração em fase sólida convencional são adaptados para uma escala miniaturizada. As principais vantagens da técnica estão associadas ao pequeno volume de amostra e de solventes utilizados, à possibilidade de realizar múltiplas extrações com um mesmo cartucho e à facilidade de automação. Os benzodiazepínicos possuem grande relevância na toxicologia dada sua ampla utilização e seus efeitos que podem, por exemplo, comprometer a capacidade de dirigir, além do uso abusivo, e como drogas facilitadoras de crimes. Neste trabalho, um método de MEPS foi desenvolvido e otimizado para a determinação de sete benzodiazepínicos e seus produtos de biotransformação (diazepam, clonazepam, flunitrazepam, alprazolam, bromazepam, 7-aminoflunitrazepam e nordiazepam) utilizando 100 µL de amostra de sangue total post mortem. Após a extração, os eluatos foram analisados por cromatografia líquida em fase reversa acoplada a espectrometria de massas. O método foi validado de acordo com as recomendações do Scientific Working Group for Forensic Toxicology, apresentando linearidade adequada de 5 a 500 ng.mL-1 . Os valores de exatidão (90,4 a 109,5%), precisão intra-dia (2,5 a 10,7 %CV) e inter-dia (1,1 a 8,0 %CV) também foram satisfatórios. MEPS foi realizada mais de 60 vezes com a mesma fase extratora sem evidências de contaminação cruzada. Dez amostras reais fornecidas pelo Instituto Médico Legal de São Paulo foram analisadas. Foram quantificados diazepam, nordiazepam, clonazepam e bromazepam. Os resultados encontrados em cada uma das amostras foram comparados com dados da literatura

Microextraction by packed sorbent (MEPS) is a sample preparation technique still little used in toxicology, where the same principles of conventional solid phase extraction are adapted to a miniaturized scale. The main advantages of the technique are associated with the small volume of sample and solvents required, the possibility of performing multiple extractions with the same cartridge and ease process automation. Benzodiazepine drugs are relevant in toxicology because of their widespread use, and effects (which may, for example, compromise the ability to drive vehicles), abuse and records as crime-facilitating drugs. In this work, a MEPS method was developed and optimized for a determination of seven benzodiazepines and their metabolites (diazepam, nordiazepam, clonazepam, flunitrazepam, 7-aminoflunitrazepam, alprazolam, and bromazepam) using 100 µL of post mortem whole blood. After extraction, the eluates were analyzed by reversed-phase liquid chromatography coupled to mass spectrometry. The method was validated according to the recommendations of the Scientific Working Group for Forensic Toxicology, presenting adequate linearity from 5 to 500 ng.mL-1 . The values of accuracy (90.4 to 109.5%), intra-day precision (2.5 to 10.7 %CV) and inter-day (1.1 to 8.0 %CV) also presented satisfactory results. MEPS was performed more than 60 times with the same extractive phase without compromising the results with the evidence of carryover. Institute of Legal Medicine were submitted to analysis by MEPS-LC-MS/MS. In these samples, the following analytes were quantified: diazepam, nordiazepam, clonazepam and bromazepam. The results found in each of the samples were compared with data from the literature

How drug companies manipulate prescribing behavior / Cómo las empresas farmacéuticas manipulan la conducta para formular los medicamentos

Abstract Pharmaceutical companies affect prescribing behavior through various means, including pharmaceutical salespeople (drug reps), drug samples, influential peers, and educational events. Information on drugs provided by industry representatives has been shown to be inaccurate. Drug samples are among the most effective marketing tools that companies have. "Thought leaders" or "key opinion leaders" are used to persuade peers to use drugs for unapproved uses, raise awareness of targeted diseases, and to shape perceptions of a drug's benefits and harms, as well as perceptions about competing drugs. Although grants provided for talks, seminars, and meetings are described as "unrestricted," it is understood that the company gets to select some speakers, and that speakers with views that undermine marketing messages will not be invited. Promotion has been shown to increase physicians' prescription of targeted drugs, and increases prescription costs.

Resumen Las empresas farmacéuticas influyen sobre la conducta para formular los medicamentos de diversas formas, incluyendo a los vendedores de las empresas farmacéuticas (representantes de medicamentos), las muestras de medicamentos, pares influyentes y eventos educativos. La información sobre los medicamentos suministrada por los representantes de la industria ha demostrado ser inexacta. Las muestras de medicamentos son una de las herramientas de mercadeo más efectivas con que cuentan las empresas. Se recurre a "Los líderes de pensamiento" o a los "principales líderes de opinión" (KOLs por sus siglas en inglés) para convencer a sus pares de que utilicen medicamentos para usos no aprobados, sensibilizar sobre patologías objetivo, y conformar percepciones sobre los beneficios y perjuicios de un medicamento, además de crear impresiones sobre medicamentos en competencia. A pesar de que se dice que las asignaciones monetarias para dictar charlas, celebrar seminarios y reuniones no deben tener restricciones, es claro que la empresa selecciona determinados conferencistas y que aquellos cuyas opiniones socaven los mensajes de mercadeo no serán invitados. Se ha demostrado que la promoción aumenta la prescripción de medicamentos específicos y aumenta los costos de esta.

Avanços e desafios em normatização de amostras grátis de medicamentos no Brasil / Advances and challenges in standardization of free samples of drugs in Brazil

Este trabalho analisou criticamente a legislação sobre amostras grátis de medicamentos no Brasil, pontuando alguns aspectos importantes relacionados à saúde da população. Foi realizado um levantamento das leis, decretos, normas e regulamentações que norteiam o assunto. A amostra grátis é uma das estratégias de publicidade e marketing usadas pela indústria farmacêutica. Em alguns casos, a indicação de certos medicamentos é baseada em dados técnicos apresentados pelos propagandistas. Por outro lado, os médicos que buscam informações técnicas em fontes com menor influência da indústria farmacêutica indicam menos os medicamentos novos, que na maioria das vezes são mais caros. Embora tenha sido observado um avanço na normatização em relação às amostras grátis, ela ainda é incipiente. Tópicos como o prazo mínimo para sua distribuição, quantidade máxima a ser entregue a cada prescritor, seu transporte, armazenamento e cuidados com o prazo de validade deveriam ser incluídas na legislação pertinente, como ocorre em outros países. Estas discussões deveriam ser retomadas com a menor influência possível dos laboratórios farmacêuticos, seguindo critérios técnico-científicos. Portanto, é necessário que este assunto seja contextualizado nas resoluções sobre amostras grátis de medicamentos, seguindo as normas das boas práticas de fabricação...

This paper critically analyzed the legislation on free samples of medicines in Brazil, scoring some important health-related aspects of the population. A survey of laws, decrees, rules and regulations that guide the subject was conducted. The free sample is one of the advertising and marketing strategies used by the pharmaceutical industry. In some cases, the designation of certain drugs is based on technical data provided by the propagandists. On the other hand, physicians seeking technical information on sources with less influence of the pharmaceutical industry indicate fewer new drugs, which most often are more expensive. Although an improvement in standardization has been seen for free samples, it is still incipient. Topics such as the time limit for its distribution, maximum to be delivered to each prescriber, transport, storage and care of the expiration date amount should be included in the relevant legislation, as in other countries. These discussions should be resumed with the least possible influence of pharmaceutical companies, following technical and scientific criteria. Therefore, it is necessary that this matter be contextualized in resolutions on free samples of medicines, following the standards of good manufacturing practices...

In vitro antimicrobial resistance of Pseudomonas aeruginosa isolated from canine otitis externa in Rio de Janeiro, Brazil

Isolates of Pseudomonas aeruginosa (167) were obtained from 528 samples of canine otitis externa, identified by biochemical reactions and tested for susceptibility to 10 antimicrobials. The most effective drug was ciprofloxacin. The study reports alarming resistance among P. aeruginosa isolated from canine otitis externa samples in Rio de Janeiro, Brazil.

Determination of the melting temperature, heat of fusion, and purity analysis of different samples of zidovudine (AZT) using DSC / Determinação da temperatura de fusão, calor de fusão e pureza análise de diferentes amostras de zidovudina (AZT) por DSC

The determination of chemical purity, melting range, and variation of enthalpy in the process of characterizing medicines is one of the principal requirements evaluated in quality control of the pharmaceutical industry. In this study, the method of purity determination using DSC was outlined, as well as the application of this technique for the evaluation of commercial samples of zidovudine (AZT) (raw material) supplied by different laboratories. To this end, samples from six different laboratories (A, B, C, D, E, and F) and the standard reference (R) from the United States Pharmacopeia (USP) were analyzed. The DSC curves were obtained in the temperature range of 25 to 200 ºC under the dynamic atmosphere of N2 (50 mL min-1), heating rate of β=2 ºC min-1, using an Al capsule containing approximately 2 mg of sample material. The results demonstrated that the standard reference presented a proportion of 99.83 percent whereas the AZT samples presented a variation ranging from 97.59 to 99.54 percent. In addition, the standard reference was found to present a temperature of onset of melting point of 122.80 ºC. Regarding the samples of active agents provided by the different laboratories, a variation ranging from 118.70 to 122.87 ºC was measured. In terms of ΔHm, the samples presented an average value of 31.12 kJ mol-1.

A determinação da pureza química, a faixa de fusão e a variação de entalpia envolvida no processo de caracterização de fármacos é um dos principais requisitos avaliados no controle de qualidade em indústrias farmacêuticas. Neste trabalho é feita uma breve abordagem sobre o método de determinação de pureza utilizando DSC, assim como a aplicação desta técnica para avaliação de amostras comerciais de zidovudina (AZT) (matéria-prima) fornecida por diferentes laboratórios. Para tal, foram analisadas amostras de seis diferentes laboratórios (A,B,C,D,E e F) e a substância química de referência (R) da United States Pharmacopeia (USP). As curvas DSC foram obtidas na faixa de temperatura entre 25 a 200 ºC, sob atmosfera dinâmica de N2 (50 mL min-1), β=2 ºC min-1, utilizando cápsula de Al contendo aproximadamente 2 mg de amostra. De acordo com os resultados, pode-se observar que a substância química de referência apresentou teor igual a 99,83 por cento e que as amostras de AZT apresentaram uma faixa de variação entre 97,59 e 99,54 por cento. Pode-se verificar, ainda, que a substância química de referência apresentou uma temperatura onset de fusão igual a 122,80 ºC. Para as amostras dos princípios ativos fornecidos pelos diferentes laboratórios, pode-se verificar uma faixa de variação entre 118,70 e 122,87 ºC. No que se refere ao ΔHm, as amostras apresentaram valor médio de 31,12 kJ.mol-1.

Mutants with heteroresistance to amphotericin B and fluconazole in Candida

Several studies have reported the occurrence of infections caused by Candida yeasts as well as the increasing prevalence of non albicans species. The aim of the present work is focused on the obtaining of heteroresistance to amphotericin B and fluconazole in Candida species using two distinct methodologies: selection and induction. Resistant samples were obtained by selective pressure using a medium with fluconazole for growth, followed by growth in a medium with amphotericin B. The selective pressure was also created beginning with growth in amphotericin B medium followed by growth in fluconazole medium. Concomitantly, samples were submitted to the induction of resistance through cultivation in increasing concentrations of fluconazole, followed by cultivation in increasing concentrations of amphotericin B. Subsequently, the induction began with amphotericin B followed by fluconazole. Three samples resistant to fluconazole and amphotericin B were obtained, two by induction (C. glabrata and C. tropicalis) and one by selection (C. tropicalis). Both C. tropicalis originated from the same wild sample. After successive transfers for drug free medium, only the sample obtained by selection was able to maintain the resistance phenotype. These results suggest that the phenotype of heteroresitance to fluconazole and amphotericin B can be produced by two methodologies: selection and induction.